數字PCR快速定量移植受體中的供體DNA

背景：來自移植受者循環中移植物的無細胞DNA（cfDNA）是排斥反應的潛在生物標志物。通過使用微陣列和供體和受體DNA的大規模平行測序，在維持階段的心臟移植后研究了其有用性。這些方法的缺點是成本高，周轉時間長，需要供體DNA。因此，我們尋求使用數字微滴PCR（ddPCR）開發快速且經濟有效的方法。

方法：從肝(LTx，n=10)、腎(KTx，n=9)和心臟(HTx，n=8)移植后的穩定受者和7例LTx后直接入院的患者采集血漿。已知的單核苷酸多態性具有較高的等位基因頻率，共建立了41種水解探針分析方法。血漿cfDNA預擴增，然后用傳統的實時熒光PCR方法確定信息(異源)SNP，然后用ddPCR對嫁接衍生cfDNA(GcfDNA)進行定量(百分比)。

結果：平均回收率為94%(SD，13%)，不精密度為4%~14%。緩解組GcfDNA分別為＜6.8%(LTx)、＜2.5%(KTx)和＜3.4%(HTx)。在LTx當天，GcfDNA大約為90%，到第10天，無并發癥LTX接受者的GcfDNA為＜15%。在2例經活檢證實的排斥反應患者中，GcfDNA升高到60%，而在1例膽汁淤積癥患者中未發現GcfDNA升高。

結論：開發了一種新的、經濟有效的、快速的技術來定量移植受者的GcfDNA。這項技術體現了一種有希望的、潛在的通用生物標記物，用于早期檢測排斥反應，這可能使更有效的治療干預成為可能。