哪些因素會影響微滴式數(shù)字PCR儀的控制性能？

　　微滴式數(shù)字PCR儀是一種核酸檢測和定量分析的新方法，可以作為傳統(tǒng)實時定量PCR的替代方法，以實現(xiàn)一致定量及稀有等位基因的檢測。數(shù)字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨、平行的PCR反應(yīng)，部分這些反應(yīng)包含了靶標(biāo)分子（陽性），而其他不包含（陰性）。單個分子可以被擴增一百萬倍或更多。在擴增期間，TaqMan化學(xué)試劑及染料標(biāo)記探針可用于檢測特定序列的靶標(biāo)。當(dāng)不存在任何靶標(biāo)序列時，沒有信號累積。PCR分析后，陰性反應(yīng)片段用于生成樣品中靶標(biāo)分子的一致計數(shù)，而無需標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)標(biāo)。

 

　　功能/主要應(yīng)用：                                                                 

　　1、微滴式數(shù)字PCR儀采用一種全新的方式進行核酸分子的定量，與傳統(tǒng)PCR、定量PCR相比，其結(jié)果的精確度、準(zhǔn)確性和靈敏度更加。其定量的結(jié)果不再依賴于Cq值而直接給出靶序列的起始拷貝數(shù)濃度，實現(xiàn)真正意義上的絕對定量。

　　2、主要應(yīng)用于疾病相關(guān)分子標(biāo)記物檢測，稀有突變序列檢測，病原微生物檢測，食品安全及轉(zhuǎn)基因成分檢測，拷貝數(shù)變異遺傳分析，基因表達分析等。

 

　　影響微滴式數(shù)字PCR儀的控制因素：

　　1、微滴式數(shù)字PCR儀之間的差別對實驗結(jié)果的影響。沒有任何兩臺PCR儀器的溫度控制是一模一樣的。相對于預(yù)設(shè)的溫度模塊溫度總是偏高或偏低，就是同一模塊不同的孔之間，溫度有時也會不一樣，相差可能達幾攝氏度之多。一些PCR儀溫度控制性能的不足造成的后果是：當(dāng)PCR儀的模塊溫度在升溫時，溫度過沖或不足，不能準(zhǔn)確的達到預(yù)設(shè)的平臺溫度。

　　2、溫度控制技術(shù)的差別對實驗結(jié)果的影響。導(dǎo)致PCR儀溫度控制性能優(yōu)劣的因素，首先是溫度控制技術(shù)。調(diào)節(jié)PCR儀模塊的溫度，使其達到并保持在某一溫度有很多方式。每一種方式都有優(yōu)點和缺點。另外，這些技術(shù)被運用控制的水平對于溫度控制的水準(zhǔn)是很重要的，且有很大不同。大多數(shù)微滴式數(shù)字PCR儀的溫度控制性能是很差的。在單一或多傳感器控制機制上的不同顯而易見的引起了溫度的不均一性。

　　3、儀器老化對實驗結(jié)果的影響。雖然PCR儀沒有任何的機械或可移動部件，但是那并不意味著它不會磨損。電子器件的性能會隨著時間的延長而老化，并由于過度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨損會引起模塊的熱斑或冷斑，通常PCR儀器不能識別這種由于機械磨損，模塊延展和收縮效應(yīng)引起的溫控性能的不同。因此，為掌握這些情況，實時監(jiān)測PCR儀的溫度控制性能是重要的。出于同樣的原因，PCR儀溫控性能的失常通常是實驗失敗或毀壞循環(huán)反應(yīng)的重要原因。