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    快看看你是不是用這個方法操作DNA提取試劑盒的

    點擊次數:2033 更新時間:2022-04-18
      DNA提取試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
     
      樣本處理及要求:
      1、組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
      2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
      3、不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
     
      DNA提取試劑盒的操作步驟:
      1、標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL
      2、加樣:分別設空白孔、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      3、加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
      4、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
      5、配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
      6、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
      7、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
      8、終止:每孔加終止液50μl,終止反應。
      9、測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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